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阿维菌素原药制备方法

编辑:内蒙古拜克生物有限公司时间:2017-12-16

   阿维菌素原药制备方法  

       产生菌 由Streptomyces avermitills所产生。其为链霉菌中的一个新种,属灰色链霉菌(与其类似的melbeycin的产生菌则为吸水链霉菌)。  
  形态为气生菌丝分枝,孢子一般在燕麦琼脂、甘油、天冬素、无机盐、淀粉及蛋清琼脂上出现。经电子显微镜观察,其孢子丝开始为紧密螺旋,而后期逐渐松开。孢子链上孢子一般超过15个,呈圆至椭圆状,表面光滑。  
  菌种的选育十分重要,不同的Avermectin的产生菌种使发酵液各组分的含量有所不同,选用新的高产菌种不仅提高Avermectin的总单位,还使B1组分的比例明显提高。  
  菌种的保存 Avermectin产生菌在YMS斜面上(酵母膏4.0g、麦芽汁10.0g、可溶性淀粉4.0g、琼脂20.0g、水1000mL、pH=7.4)生长,再将孢子置于20%的甘油水溶液中,于-30℃保存。  
  种子制备 通常可采用两种培养基,在1000mL水中的成分如下。  
  A:Cerelose 1.0g、可溶性淀粉10.0g、牛肉膏3.0g、Ardamine PH 5.0g、N-Z-Amine E 5.0g、MgSO4·7H2O 0.05g、KH2PO4 0.182g、Na2HPO4 0.190g、CaCO3 0.5g、pH=7.0。  
  B:乳糖20.0g、distillers' Solubles 15g、Ardamine PH 5.0g, pH=7.0。将甘油孢子贮藏液接种在上述种子培养液中,于28℃培养1~2d后再接种到发酵培养基中。接种量通常为3%~5%。  
  生物合成 生物合成可采用下列发酵培养基。  
  A:Amidax 40g、distillers' Solubles 7g、Ardamine PH 5g、CoCl2·6H2O 0.05g、水1000mL,pH=7.3。  
  B:Cerelose 45g、Prepionlzed milk nutrient 24g、Ardamine PH 2.5g、聚乙二醇P-2000 2.5mL、水1000mL,pH=7.0。  
  研究表明,Avermectin的产生量与下列因素有关:

       ①菌种。菌种选育不仅可提高微生物产生的发酵单位,而且能改变各组分的比便,由此提高所需组分含量,据报道,加入Slnefungin及S-adenosyl methione等甲基转移酶抑制剂也可改变产物中B和A的比例;菌种形态应选择菌丝丰满的菌种进行发酵(P.A.McCann所用培养基为糊精0.4%、肉膏1%、酵母0.4%、琼脂2%,pH=7.0)。

       ②C/N比。对产量和组分影响甚大。

       ③消泡剂。聚乙二醇是较好的消泡剂,它不仅可提高发酵单位,且可抑制发酵过程中一种橙黄色蜡状物的产生。

       ④搅拌。对发酵效果影响较大,由于菌丝体对叶轮剪切较为敏感,故采用水翼轮式搅拌装置能改善供氧,提高产量。

       ⑤无机盐。其他各种无机盐对发酵无有利的影响。